紫外可見分光光度法（UV-Vis）是化學、生物、材料領域最基礎的定量手段之一。然而，傳統(tǒng)單光束儀器易受光源波動、檢測器漂移、環(huán)境溫度變化影響，導致基線漂移、重復性差。雙光束紫外可見分光光度計通過引入?yún)⒖脊饴?，實時校正這些干擾，如同為測量裝上“自穩(wěn)陀螺”，確保每一次吸光度讀數(shù)都忠于樣品本身。

雙光束原理：實時差分的智慧

儀器內(nèi)部，一束來自氘燈（UV）或鎢燈（Vis）的光被斬光器（Chopper）或分束器分為兩路：

樣品光束：穿過裝有樣品的比色皿；

參比光束：穿過空白溶劑或空氣。

兩束光交替到達同一檢測器（或分別由兩個匹配檢測器接收），儀器計算二者信號比值，輸出校正后的吸光度（A=log(I?/I)）。由于光源波動、電子噪聲對兩光束影響相同，差分后被有效抵消。

結(jié)構(gòu)優(yōu)勢與性能提升

基線穩(wěn)定性：長時間掃描（如200–800 nm）基線漂移<0.001 AU/h；

重復性高：RSD<0.5%，適合動力學研究；

自動基線校正：無需手動調(diào)零，提升效率；

支持多種附件：積分球（測漫反射）、恒溫池架、自動進樣器。

典型應用場景

1.核酸與蛋白定量

DNA/RNA在260 nm、蛋白質(zhì)在280 nm的吸光度，用于濃度計算與純度評估（A260/A280比值）。

2.酶動力學研究

監(jiān)測NADH在340 nm吸光度隨時間下降，計算酶活性。

3.藥物溶出度測試

片劑在模擬胃液中的釋放曲線，通過特征波長吸光度換算濃度。

4.納米材料表征

金納米顆粒的表面等離子共振（SPR）峰位置與強度反映粒徑與聚集狀態(tài)。

5.水質(zhì)分析

COD、硝酸鹽、磷酸鹽等通過顯色反應后，在特定波長定量。

與單光束儀器的對比

表格

特性單光束雙光束

基線穩(wěn)定性差優(yōu)

掃描速度快（無需切換）稍慢（需斬光）

成本低高

適用場景單波長定點測量全波段掃描、動力學

技術(shù)演進：從機械斬光到數(shù)字補償

早期依賴機械斬光器，存在磨損與噪音；現(xiàn)代機型采用雙檢測器+數(shù)字同步采樣，或結(jié)合鎖相放大技術(shù)，進一步提升信噪比。部分儀器還集成二極管陣列檢測器（DAD），實現(xiàn)毫秒級全譜采集。

結(jié)語：在光的波動中尋找確定性

雙光束設計體現(xiàn)了一種深刻的工程思想：不試圖消除干擾，而是讓干擾在測量中自我抵消。這種“以變應變”的智慧，使UV-Vis這一百年技術(shù)至今仍是實驗室最普及的分析手段之一。